荧光偏振法检测样品的方法及其中使用的试剂
2019-11-22

荧光偏振法检测样品的方法及其中使用的试剂

本发明提供一种分析样品中检测对象的荧光偏振法。所述荧光偏振法包括以下步骤:(a)提供蛋白与荧光染料共价结合的荧光标记蛋白,其中所述蛋白能够特异结合所述检测对象;(b)使所述荧光标记蛋白和所述检测对象结合;和(c)检测在所述荧光标记蛋白中由于它与所述检测对象结合而产生的荧光偏振度的变化。

(实施例5)用芘标记的抗-LDL多克隆抗体检测LDL将包含400μg/ml的抗-LDL多克隆抗体的溶液(700μl)放入小池(5×5mm)中,以便于检测荧光偏振度。以下是检测芘标记的抗-LDL多克隆抗体的条件:35℃的检测温度、330nm的激发波长、397nm的荧光波长和0.943的G因子。

荧光偏振法检测样品的方法及其中使用的试剂

(实施例5)用芘标记的抗-LDL多克隆抗体检测LDL将包含400μg/ml的抗-LDL多克隆抗体的溶液(700μl)放入小池(5×5mm)中,以便于检测荧光偏振度。以下是检测芘标记的抗-LDL多克隆抗体的条件:35℃的检测温度、330nm的激发波长、397nm的荧光波长和0.943的G因子。

工业适用范围本发明所述方法提供了一个检测反应系统简单和检测操作容易的荧光偏振法,尤其是适合检测高分子量物质的方法。

技术背景本领域已知的荧光偏振法是作为检测样品中物质的方法。所述方法是建立在下述原理的基础上,即当用线性偏振光激发荧光标记的化合物时,从所述化合物发射出的荧光有一定程度的偏振,所述偏振和该化合物分子重量成正比。

因此,需要研究检测反应系统简单和检测操作容易的荧光偏振法,具体地说是适合于检测高分子量物质的方法。

荧光偏振法检测样品的方法及其中使用的试剂

作为生物物质的所述蛋白可以是抗体、激素、炎症标记、凝固因子、载脂蛋白、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、糖基化白蛋白、糖基化血红蛋白、血红蛋白、癌症标记或酶。

本发明还涉及分析样品中细菌或病毒的荧光偏振法,所述方法包括以下步骤:(a)提供抗体与荧光染料共价结合的荧光标记抗体,其中所述抗体能够特异结合所述细菌或病毒;(b)使所述荧光标记的抗体和所述细菌或所述病毒结合;和(c)测量在所述荧光标记抗体中由于它与所述细菌或病毒结合而产生的荧光偏振度的变化。

特别地,当分子量的变化在大约5,000至50,000之间时(即当检测对象的分子量为几千至几万时),优选的荧光染料的荧光寿命为大约1至大约15纳秒。这种荧光染料的例子包括花色素苷和罗丹明。当分子量的变化是大约50,000至500,000之间时(即当检测对象的分子量为几万至几十万时),优选的荧光染料的荧光寿命为大约10纳秒至大约150纳秒。这种荧光染料的例子包括二烷基氨基萘和芘衍生物。当分子量的变化在大约500,000至5,000,000之间时(即当检测对象的分子量为几十万至几百万时),优选的荧光染料的荧光寿命为大约100纳秒至大约1000纳秒。这种荧光染料的例子包括芘衍生物和金属络合物。